重組耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF中壓預(yù)裝柱
| 【編號(hào)】BK-NRPB06S | 【CAS號(hào)】CAS | ||
| 【貨號(hào)】BK-NRPB06S-Y25 | 【規(guī)格】 | ||
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| 價(jià)格： 登錄查看 | |||
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品 名：耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF
英文名：Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF
規(guī) 格：20 ml，100 ml，1 L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：20%乙醇，2 ~ 8℃
保質(zhì)期：3年
相關(guān)介紹：
耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF與普通的蛋白A瓊脂糖凝膠相比，主要提高了凝膠的耐堿性，可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除熱源。在骨架與重組耐堿蛋白A鍵合上分別設(shè)計(jì)了延伸碳臂和定向結(jié)合位點(diǎn)，保證了重組耐堿蛋白A與骨架的定向牢固鍵合，以及與抗體的高效親和。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
4%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
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配基 |
重組耐堿蛋白A |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒徑 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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工作（清洗）pH值 |
3 ~ 11(2 ~ 13) |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥40 mg/ml IgG |
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1）配基脫落：約1~7 ng rat-PA/mg IgG，配套的rat-PA試劑盒（NRPB53S）檢測(cè)多次使用的洗脫液中殘留rat-PA含量
2）耐堿性
在25℃的條件下，將rat-PA浸在不同濃度的NaOH溶液中：
0.1 M 處理72 h載量維持在90%以上；
0.5 M處理16 h在80%以上，處理36 h在50%以上；
1.0 M處理4 h在90%以上，處理8 h在50%以上。
3）耐酸性
在25℃的條件下，將rat-PA浸在不同pH的酸溶液中：
pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 處理6天載量均維持在90%以上
0.5 M HCl處理2天載量在80%以上，處理6天在50%以上
4）耐壓性
儀器：AKTA explorer 100
柱子：1.0 cm×30 cm
流速：每30 s增加0.5 ml/min
5）使用壽命
200次循環(huán)純化牛血清中IgG，每次使用0.1 M NaOH處理15 min，200次使用后未發(fā)現(xiàn)明顯的載量損失。
應(yīng)用舉例：
結(jié)合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸緩沖液，pH 4.0
中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預(yù)填柱用5 ~ 10個(gè)柱床體積的蒸餾水洗去保存液；
2)用結(jié)合緩沖液結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個(gè)柱床體積；
3)將5 ml兔多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋到50 ml，0.45 μm濾膜過(guò)濾上樣；
4)用結(jié)合緩沖液再洗 5 ~ 10個(gè)柱床體積；
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性；
6)每次使用后用3 ~ 5個(gè)柱床體積的0.1 M NaOH溶液再生清洗；
7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來(lái)的兔多抗純度在95%以上。
圖 1
注意事項(xiàng)：
1)預(yù)填柱使用簡(jiǎn)易方便，在沒(méi)有儀器設(shè)備的條件下也可以完成純化任務(wù)。
2)樣品洗脫后一般pH很低，應(yīng)立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
3)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡，可以自行重裝柱子。
4)使用后應(yīng)進(jìn)行在位清洗，一般建議用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3個(gè)柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上。
5)更高要求（消毒、去內(nèi)毒素、超牢固蛋白殘留等）的在位清洗，可以先用含還原劑（如100 mM DTT、β-ME或1-巰基甘油）的平衡緩沖液清洗3 ~ 5個(gè)柱體積，再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5個(gè)柱體積（10 ~ 30 min），然后用無(wú)菌無(wú)內(nèi)毒素的平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上。
6)雖然本產(chǎn)品具有較好的堿耐受性，但長(zhǎng)期使用較高的NaOH濃度（如0.5 mol/L）清洗仍會(huì)縮短使用壽命，建議每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次，每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。
7)為了更好的保護(hù)填料，應(yīng)避免強(qiáng)烈的pH變化，建議酸性洗脫目的抗體后，用平衡緩沖液恢復(fù)至中性，再進(jìn)行NaOH清洗。
8)本產(chǎn)品具有極低的配基脫落率（＜10 ng/mg IgG），結(jié)合耐堿特性，特別適用于單克隆抗體的生產(chǎn)。但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期儲(chǔ)存后首次使用配基脫落率會(huì)比較高，建議長(zhǎng)期儲(chǔ)存后的首次使用，先用酸性洗脫液清洗3 ~ 5個(gè)柱體積，再用平衡緩沖液平衡和樣品純化。
推薦流速
預(yù)裝柱體積 1 ml 5 ml 10 ml
流速(ml /min ) 0.2 1 2
9)
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推薦流速 |
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預(yù)裝柱體積 |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml /min ) |
0.2 |
1 |
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