重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF中壓預裝柱
| 【編號】BK-NRPB01S | 【CAS號】CAS | ||
| 【貨號】BK-NRPB01S-Y25 | 【規格】 | ||
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| 價格： 登錄查看 | |||
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品 名： 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF
英文名： Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF
規 格： 20 ml，100 ml，1 L，1 ml預裝柱，5 ml預裝柱，特殊規格訂制
運 輸： 2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存： 20%乙醇，2 ~ 8℃
保質期： 3 年
相關介紹：
蛋白A是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質，包含有5個區域，可以同IgG的Fc片段結合。作為一個親和配基，蛋白A能夠比較緊密地偶聯到NUPharose上，使得這些區域可以同游離的IgG自由結合。一分子的蛋白A可以結合兩分子的IgG。
技術指標：
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基質 |
4%高度交聯瓊脂糖凝膠 |
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配基 |
重組蛋白A |
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配基密度 |
≥ 6 mg/ml |
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填料粒徑 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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pH穩定性 |
pH 3 ~ 9 |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥40 mg/ml IgG |
抗體與蛋白A、蛋白G的結合力：
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種類 Species |
亞型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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馬 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
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兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
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豬Pig |
IgG |
+++ |
+ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
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雞Chicken |
IgY |
- |
- |
注：-表示不結合；+表示微弱結合；++表示中等結合；+++表示很強結合。
應用舉例：
結合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸緩沖液，pH 4.0
中和緩沖液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0
1)1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；
2)用結合緩沖液結合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積；
3)將5 ml兔多抗血清用結合緩沖液稀釋到50 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；
4)用結合緩沖液再洗 5 ~ 10個柱床體積；
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性；
6)每次使用后用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M 檸檬酸緩沖液（pH 3.0）再生清洗；
7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。
圖 1
注意事項：
1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。
2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，影響純化效果，如果已經產生氣泡，可以自行重裝柱子。
4)通常（每次）目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M檸檬酸緩沖液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5個柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上，作簡易再生。
5)使用數次后應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上；或70%乙醇洗5個柱體積以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類，恢復柱子的載量和流速。
6)
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推薦流速 |
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預裝柱體積（ml） |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml/min) |
0.2 |
1 |
2 |
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