Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF重力預(yù)裝柱
| 【編號(hào)】BK-NRPB42S | 【CAS號(hào)】CAS | ||
| 【貨號(hào)】BK-NRPB42S-Z25 | 【規(guī)格】 | ||
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| 價(jià)格： 登錄查看 | |||
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品 名：Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF
英文名：Strep-Tactin NUPharose Fast Flow, Strep-Tactin NUPharose FF
規(guī) 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：20%乙醇，2 ~ 8℃
保質(zhì)期：3年
相關(guān)介紹：
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)，主要用于純化Strep II標(biāo)簽蛋白。Strep II標(biāo)簽為8個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK），由于標(biāo)簽小，僅為1 kDa左右，一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，常用于融合表達(dá)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和純化。
本產(chǎn)品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素（Streptavidin）的突變體，與鏈霉親和素相比，Strep-Tactin對(duì)Strep II標(biāo)簽的親和能力至少?gòu)?qiáng)10倍以上，能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結(jié)合和解離。由于Strep-Tacin對(duì)Strep II標(biāo)簽具有高度特異性，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品。
Strep II標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物素競(jìng)爭(zhēng)方式進(jìn)行洗脫，該洗脫方式比較溫和，一般不會(huì)影響蛋白質(zhì)的性質(zhì)。如Strep II標(biāo)簽蛋白質(zhì)能耐受堿性條件，也可用堿液洗脫，比如10 mM NaOH等。
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿性條件，可以用0.5 M NaOH進(jìn)行再生清洗和去除熱源等。
另外，2-(4-羥基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝膠再生，過(guò)量的HABA能以競(jìng)爭(zhēng)的方式替換脫硫生物素，但在無(wú)HABA的緩沖液中， Strep-Tactin與HABA會(huì)發(fā)生解離，從而使HABA脫落，實(shí)現(xiàn)再生。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
4%瓊脂糖凝膠微球 |
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配基 |
Strep-Tactin |
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配基密度 |
≥5 mg/ml |
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填料粒徑 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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pH穩(wěn)定性 |
短時(shí)間pH 2 ~ 13；長(zhǎng)時(shí)間pH 4 ~ 11 |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥6 mg/ml Strep II標(biāo)簽蛋白 |
使用方法：
1 推薦緩沖液
純化Strep II標(biāo)簽蛋白
結(jié)合緩沖液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；
或20 mM NaH2PO4，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4
洗脫緩沖液：結(jié)合緩沖液 + 2.5 mM 脫硫生物素；
或10 mM NaOH
再生緩沖液：0.5 M NaOH；
或結(jié)合緩沖液+1 mM HABA
2 樣品準(zhǔn)備
上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應(yīng)過(guò)0.45 μm濾膜或高速離心去除不溶物。
3 樣品純化
3.1 平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用蒸餾水清洗5個(gè)柱體積去除保存液，再用結(jié)合緩沖液平衡5個(gè)柱體積，建議流速為100 cm/h。
3.2 上樣：將準(zhǔn)備好的樣品上柱，建議流速為20 ~ 100 cm/h，可根據(jù)實(shí)際結(jié)合情況選擇流速，能獲得較好的效果。
3.3 再平衡：上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個(gè)柱體積以上，或平衡至基線，洗去雜質(zhì)，推薦流速為100 cm/h。
3.4 洗脫：用洗脫緩沖液洗10 ~ 20個(gè)柱體積，建議流速為100 cm/h，收集的洗脫液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍，并根據(jù)需要置換緩沖液。
3.5 NaOH再生：洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3 ~ 5個(gè)柱體積，并用0.5 M NaOH再生3 ~ 5個(gè)柱體積，再用蒸餾水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一次純化。
3.6 HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的，還可以用HABA緩沖液再生，一般用HABA的結(jié)合緩沖液洗15個(gè)柱體積，再用結(jié)合緩沖液洗30個(gè)柱體積，然后可以用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一步純化。HABA上柱后凝膠顏色會(huì)變?yōu)榧t橙色，在結(jié)合緩沖液平衡后會(huì)恢復(fù)正常的白色，這種再生方式一般使用體積會(huì)大些。
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